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產品用途：用于精確檢測奶粉、牛奶、酸奶等乳制品及飼料樣本中三聚氰胺的殘留量。
產品特點：
1、靈敏度高，試劑盒靈敏度為3ppb；
2、室溫條件即可完成檢測實驗；
3、可批量檢測樣品，每批次檢測50分鐘內即可出結果；
4、檢測結果穩定，變異系數��；
二、試驗原理
五、使用單位需自備的設備及試劑
設備：
試劑：
六、提供的材料與試劑
七、溶液的配制
八、樣本前處理步驟
產品說明：
一、概要
三聚氰胺是一種低毒、無味的純白色單斜棱晶體，形似蛋白 粉，屬于三嗪類含氮雜環化合物，廣泛應用于塑料、染料、化肥的生產和紡織行業。由于三聚氰胺分子含氮量很高，只要添加到食品中就可在檢測中造成蛋白質含量較高的假象。目前在飼料、牛奶、奶粉、餅干、奶糖等相關產品均發現有三聚氰胺殘留現象。動物實驗結果表明，三聚氰胺的攝入可能會導致繁殖障礙、膀胱炎、慢性腎炎、腎結石、甚至膀胱癌�，F有的檢測三聚氰胺方法如液相色譜-質譜聯用法、質譜電噴射離子技術其樣品前處理復雜、所需儀器昂貴、操作復雜、耗費時間。而使用三聚氰胺ELISA試劑盒能夠既快速又準確的分析樣品中三聚氰胺殘留。
本試劑盒是應用ELISA技術研發而成的檢測產品，操作時間短于45min，能限度地減少操作誤差和工作強度。
二、試驗原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被三聚氰胺抗原，樣本殘留的三聚氰胺和微孔條上預包被的抗原競爭抗三聚氰胺抗體，加入TMB底物顯色，樣本吸光值與其殘留物三聚氰胺成負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣本中三聚氰胺的含量。
三、適用范圍
可定性、定量檢測奶粉、牛奶、酸奶等乳制品及飼料樣本中三聚氰胺的殘留量。
四、交叉反應率
三聚氰胺………………………………………………100％
五、使用單位需自備的設備及試劑
設備：
┅┅微孔板酶標儀450/630nm
┅┅渦旋儀
┅┅天平：感量0.01g
┅┅聚苯乙烯離心管
┅┅微量移液器
試劑：
----去離子水
----乙腈（分析純）
六、提供的材料與試劑
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組份名稱
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96T裝量
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48T裝量
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酶標板
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96T
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48T
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標準品×6瓶*
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1 ml |
0.5 ml |
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三聚氰胺酶標物
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6 ml |
3 ml |
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三聚氰胺抗試劑
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6 ml |
3 ml |
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顯色液
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12 ml |
6 ml |
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終止液
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6 ml |
3 ml |
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濃縮洗滌液（10×）
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40 ml |
20 ml |
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樣品稀釋液
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40ml
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20 ml |
*注：標準品濃度為0 ppb, 3 ppb, 9 ppb, 27 ppb, 81ppb,243ppb。
依次編號①②③④⑤⑥
七、溶液的配制
配液1：1×洗滌工作液
用去離子水將濃縮洗滌液（10×）按1 : 9體積比進行稀釋，即1份濃縮洗滌液（10×）+9份去離子水；用于酶標板的洗滌，1×洗滌工作液在4 ℃環境可保存一個月。
八、樣本前處理步驟
樣本處理前須知：
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否潔凈，必須使用潔凈實驗器具，以避免污染干擾實驗結果。
（c）未處理的樣本冷凍保存。
（一）奶粉前處理方法
┅┅稱1g奶粉樣本，加10ml去離子水，充分振蕩2～3min，4000rpm離心10min。
┅┅棄去上層脂肪層，吸取中間層液體100ul用于分析。
樣本稀釋倍數：10
（二）適用于生鮮奶、成品純牛奶：
┅┅將牛奶樣本用4000rpm離心10min；
┅┅棄去上層脂肪層，吸取中間層液體100ul用于分析。
樣本稀釋倍數：1
（三）發酵乳/奶油
┅┅取5g樣品，加入10ml乙腈，劇烈振蕩5min，過濾或于4000r/min離心5min，取1ml濾液或上清，于50℃下氮氣吹干，加入1ml樣品稀釋液和0.5ml石油醚，振蕩混勻，于3800 r / min下離心5min，將下層液體轉移到另一潔凈離心管中，用于檢測。
樣本稀釋倍數：3
九、檢測步驟
測定前應須知：
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環境中取出，置于室溫（20～25 ℃）平衡30 min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8 ℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5、加標準品/樣本：加標準品/樣本50 ml/孔到對應的微孔中，再加入酶標物50 ml/孔，再加入抗試劑50 ml/孔輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫25℃避光環境中反應30 min。
6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌工作液300 ml/孔，充分洗滌5次，每次間隔10 s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、顯色：加入顯色液100 ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫25℃避光環境反應10min。
8、測定：加入終止液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630 nm檢測，請在5 min內讀完數據），測定每孔OD值。（若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定）。
十、 結果判定
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，而定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含三聚氰胺成負相關。
1、用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ppb)。假設樣本1的吸光度值為0.677，樣本2的吸光度值為1.375，標準液吸光度值分別是：0ppb為1.730；3ppb為1.464；9ppb為1.197；27ppb為0.738；81ppb為0.347；243ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是27ppb～81ppb；樣本2的濃度范圍是3ppb～9ppb。再乘以其對應的稀釋倍數即可得出樣本中三聚氰胺的濃度范圍。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以個標準（0標準）的吸光度值，再乘以，即
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百分吸光度值（%）＝
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B
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×
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B0
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B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0（ppb）標準溶液的平均吸光度值
（2）標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標，以三聚氰胺標準品濃度（ppb）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中三聚氰胺實際殘留量。
若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（歡迎來電索�。�
十一、檢測方法靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度：3 ppb
樣本檢測限：
奶粉……………………………………………………30ppb
發酵乳/奶油……………………………………………9ppb
純牛奶、生鮮奶…………………………………………3ppb
回收率：
奶粉…………………………………………………100±10%
酸奶…………………………………………………80±10%
純牛奶、生鮮奶……………………………………100 ± 10%
精密度：
試劑盒的變異系數均小于10%
十二、注意事項
1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件
保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質的跡象
發色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。
8、在加入底物液后，一般顯色時間為10～15min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到20min（或更長），但不得超過20min。反之，則減短反應時間。
9、該試劑盒反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。
十三、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。
保存期：該產品有效期為12個月。