點擊圖片查看原圖
產品用途：用于檢測蜂蜜、牛奶、水產品、肉類、蜂皇漿等樣本中存在的氯霉素。
產品特點：
1、試劑盒靈敏度高達0.025ppb，檢測精確；
2、檢測范圍廣，蜂蜜、牛奶、水產品、肉類、蜂皇漿等樣品都可以檢測；
3、常溫條件下即可進行檢測試驗。
產品說明：
一、概要
氯霉素（Chloramphenicol，CAP）是一種常用的廣譜抗菌素，通過抑制細菌蛋白質合成而發揮抑菌作用，對大多數革蘭氏陰性和陽性細菌有效，而對革蘭氏陰性菌作用較強，特別是對傷寒、副傷寒桿菌作用最強。但使用氯霉素存在嚴重的毒副作用，主要是抑制骨髓造血功能，引起粒細胞及血小板減少癥以及再生障礙性。再生障礙性雖少見，但難逆轉，�？芍滤�。本試劑盒是應用免疫學原理建立的一種特異、敏感的檢測方法，可用于檢測蜂蜜、牛奶、水產品、肉類、蜂皇漿等樣本中存在的氯霉素。
二、試驗原理
本試劑盒采用直接競爭ELISA方法檢測樣本中的氯霉素，在微孔條上預包被上偶聯抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學反應的原理來進行的，樣本中的氯霉素和微孔條上預包被偶聯抗原競爭抗氯霉素抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣品中的氯霉素含量與樣品的吸光度值呈反比，與標準曲線比較即可得出氯霉素含量。
三、適用范圍
用于檢測蜂蜜、牛奶、水產品、肉類、蜂皇漿等樣本中存在的氯霉素。
四、使用單位需自備的設備及試劑
設備：
┅┅微孔板酶標儀450nm/630nm
┅┅樣品破碎器或料理機
┅┅振蕩器
┅┅恒溫培養箱
┅┅渦旋儀
┅┅離心機
┅┅天平：感量0.01g
┅┅微量移液器：單道 20μL～200μL、200μL～1000μL、
多道 250μL
┅┅聚苯乙烯離心管：1.5mL、10mL、50mL
試劑：
---- 甲醇（分析純）
---- 氯化鈉
----去離子水
五、提供的材料與試劑
|
組份名稱
|
96T裝量
|
備注
|
|
酶標板
|
96T
|
其它各規格裝量按比例增加或減少，具體裝量以實物為準。
|
|
標準品×6瓶*
|
1mL
|
|
|
氯霉素酶結合物
|
13mL
|
|
|
濃縮樣本稀釋液（2×）
|
30mL
|
|
|
濃縮洗滌液（10×）
|
50mL
|
|
|
底物液A
|
6mL
|
|
|
底物液B
|
6mL
|
|
|
反應終止液
|
6 mL
|
*注：標準品為0μg/kg, 0.05μg/kg, 0.2μg/kg,, 0.8μg/kg ,
3.2μg/kg, 12.8μg/kg。
六、溶液的配制
1. 配液1: 將待測樣品及試劑盒中所有成分，在25℃環境下，至少回溫40分鐘。
2. 工作洗滌液配制。（用于洗板）
利用蒸餾水將10倍濃縮洗滌液以1:9比例稀釋（即1mL 10倍濃縮洗滌液+9mL蒸餾水），即可作為清洗微孔使用的工作洗滌液。（10倍濃縮洗滌液請確實回溫后使用，并請檢查溶液底部之結晶是否完全溶解。）還原型孔雀石綠抗體工作液配制。
3. 樣本稀釋液配制
利用蒸餾水將2倍濃縮樣本稀釋液以1:1比例稀釋（即1mL 2倍濃縮樣本稀釋液+1mL蒸餾水），即可作為樣本稀釋液。（2倍濃縮樣本稀釋液請確實回溫后使用。）稀釋后的稀釋液請盡快使用，若用不完請保存于2~8 ℃，請勿超過一星期。
七、樣本前處理步驟
樣本處理前須知
處理任何樣本時，都必須注意：
(a) 實驗中須使用一次性吸頭，吸取不同的試劑需更換吸頭
(b) 實驗之前須檢查各種實驗器具是否潔凈，必須使用潔凈實
驗器具，以避免污染干擾實驗結果。
(c) 處理好的樣本應立即用于檢測。
（一）牛奶、蜂蜜、飼料（稀釋倍數：1）
---稱取2.0±0.05g 待檢樣品至15ml 聚苯乙烯離心管中，加入3ml去離子水（蜂皇漿加
3ml 0.5M NaOH），搖勻，再加入8ml乙酸乙酯充分振搖混合5min，5000rpm離10min；
---取2ml上層相于小燒杯中，并用50℃氮氣流吹干，加入稀釋好的樣本稀釋液（見
配液3）0.5ml復溶燒杯中吹干后殘留物；
---取50μl用于分析；
（二）組織、水產、全蛋（稀釋倍數：1）
---稱取2.0±0.05g 待檢樣品（蛋需打勻）至15ml 聚苯乙烯離心管中，加入8ml乙酸乙
酯充分振搖混合5min，5000rpm離心10min；
---取2ml上層相于小燒杯中，并用50℃氮氣流吹干，加入稀釋好的樣本稀釋液（見
配液3）0.5ml，并加入0.5ml正己烷復溶燒杯中吹干后殘留物，去除上層相；
---取下層水相50μl用于分析；
八、 檢測步驟
1、于適當測試孔分別加入50μL標準溶液 (0、0.05、0.2、0.8、3.2、12.8ppb)；
2、在另外的測試孔加入50μL已完成前處理的樣品檢測液；
3、再于每一測試孔另再加入100μL酶結合物，輕敲板子四周，使其充分混合后于
25℃下避光靜置30分鐘；
4、將測試孔中反應液甩掉，用洗滌工作液（250μL/孔）洗滌微孔板4-5次，一
次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體；
5、于每一測試孔中先加入50μL底物液A，再加 50μL底物液B，輕敲板子四周，使
其充分混合，于25℃下避光靜置15分鐘；
6、加入終止液，每一測試孔加入50μL，在波長450 nm 下檢測吸光度值，結果在5min
中內讀��；
結果判定
（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以個標準（0 標準）的吸光度值，再乘以，即
|
百分吸光度值（%）＝
|
B
|
×
|
|
B0
|
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0(μg/kg)標準溶液的平均吸光度值
（2）標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標，以氯霉素標準品濃度（μg/kg）的對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中氯霉素實際量。
十、檢測方法靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度：
本試劑盒的氯霉素（Chloramphenicol）標準品檢測下限為0.05ppb，此濃度之吸光值與陰性標準溶液（0 ppb）之吸光值有明顯的差異。檢測上限為12.8ppb，超出此濃度之檢體需經適量稀釋后再進行檢測。
回收率：
牛奶、蜂蜜、飼料………………………………80%—120%
組織、水產、全蛋………………………………80%—120%
精密度：
試劑盒的變異系數均小于10%
十一、注意事項
1、試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件
保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質的跡象
發色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.8（A450nm<0.8）時，表示試劑可能變質。
8、在加入顯色液后，一般顯色時間為10min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到15min（或更長）。反之，則減短反應時間。
9、濃縮洗滌液如有結晶屬正�，F象，請加熱溶解后使用。
10、該試劑盒反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。
11、本試劑盒應用于篩查實際樣品，檢測若為陽性樣品，應該用另一種方法如HPLC或LC/MS加以確證。
十二、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。
保存期：該產品有效期為12個月。